XÁC ĐỊNH QUY TRÌNH REAL TIME RT-PCR VỚI CHẤT NHUỘM EVAGREEN ĐỊNH LƯỢNG VÀ ĐỊNH CHỦNG VIRUT GÂY HỘI CHỨNG RỐI LOẠN SINH SẢN VÀ HÔ HẤP TRÊN HEO

  • Võ Khánh Hưng và cs

Tóm tắt

TÓM TẮT

Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp trên heo (PRRS, bệnh tai xanh) do virut (PRRSV) gây  nhiều thiệt hại kinh tế. PRRSV gồm 2 dòng, châu Âu (EU) và Bắc Mỹ (NA), trong đó có chủng Trung Quốc - một biến chủng từ dòng Bắc Mỹ. Trong nghiên cứu này, quy trình real time RT-PCR sử dụng chất phát huỳnh quang EvaGreen với cặp mồi F7 và R7 được thiết kế trên vùng ORF7 cho phép phân biệt dòng NA/EU và định lượng PRRSV. Toàn bộ vùng ORF7 của bộ gen PRRSV được gắn vào plasmid pGEM T Easy và chuyển vào tế bào chủ E. coli DH5α để có mẫu DNA dùng trong tạo đường chuẩn định lượng của quy trình. Độ nhạy của quy trình real time RT-PCR được xác định là 101 bản sao/μl. Tính đặc hiệu của phản ứng được khẳng định với porcine circovirus (PCV) và mẫu máu âm tính với PRRSV. Quy trình có thể định dòng PRRSV châu Âu và dòng Bắc Mỹ dựa vào sự chênh lệch về nhiệt độ nóng chảy (Tm) khi phân tích đường cong nhiệt độ nóng chảy. Nhiệt độ Tm của sản phẩm khuếch đại dòng châu Âu là 83,4oC và dòng Bắc Mỹ là 84,4oC (CV = 0,08%, P < 0,01). Quy trình real time RT-PCR sử dụng EvaGreen cho kết quả nhanh, nhạy và chính xác trong định dòng và định lượng PRRSV; đã được áp dụng để phân biệt dòng cũng như định lượng PRRSV trên một số mẫu máu và mẫu ngoáy hầu họng heo từ một trại chăn nuôi công nghiệp.

Từ khóa: PRRSV, real time RT-PCR, Định chủng, Phân tích nhiệt độ nóng chảy, EvaGreen.

điểm /   đánh giá
Phát hành ngày
2013-03-12
Chuyên mục
Nghiên cứu khoa học