TẦN SỐ XUẤT HIỆN VIBRIO CHOLERAE TRÊN TÔM VÀ NHUYỄN THỂ, XÁC ĐỊNH SEROGROUP O1, O139 VÀ BIOTYPE CỦA V. CHOLERAE BẰNG KỸ THUẬT Multiplex-PCR
Tóm tắt
TÓM TẮT
Nghiên cứu được thực hiện trên 240 mẫu tôm và nhuyễn thể thu thập ở Đồng Nai, TP. Hồ Chí Minh. Mẫu được tăng sinh bằng hai dung dịch muối pepton kiềm không bổ sung và bổ sung polymycin B 50 UI và 3 % NaCl. DNA ly trích trực tiếp từ dung dịch tăng sinh được kiểm tra bằng 3 phản ứng m-PCR để xác định (i) loài V. cholerae (m-PCR1); (ii) serogroup O1, O139 (m-PCR2) và (iii) biotype (m-PCR3). Bên cạnh đó, các gốc vi khuẩn cũng định danh bằng phương pháp sinh hóa và xác định lại bằng các phản ứng m-PCR.
Phản ứng m-PCR1 phát hiện V. cholerae trên 44,2% số mẫu ở môi trường 1 và 45,8% số mẫu ở môi trường 2. Trong khi đó, phương pháp sinh hóa chỉ phát hiện V. cholerae ở hai môi trường lần lượt là 41,3% và 10,0%.
Phản ứng m-PCR2 sử dụng DNA ly trích trực tiếp từ dung dịch tăng sinh, kết quả phát hiện gen từ 106 mẫu ở môi trường 1 và 110 mẫu ở môi trường 2 lần lượt là 2 và 2 mẫu dương tính đồng thời hai gen ctxA và rfbO1, 8 và 11 mẫu dương tính đồng thời hai gen ctxA và rfbO139, 2 và 4 mẫu chỉ dương tính với rfbO1, 2 và 4 mẫu chỉ dương tính với rfbO139, 13 và 18 mẫu chỉ dương tính với ctxA. Ngoài ra, môi trường tăng sinh 2 còn giúp phát hiện được hai mẫu dương tính đồng thời cả 3 gen ctxA, rfbO1 và rfbO139.
Sử dụng DNA của từng gốc đã định danh, kết quả m-PCR2 phát hiện serogroup từ 99 mẫu ở môi trường 1 và 24 mẫu ở môi trường 2 lần lượt là 5 và 3 mẫu dương tính với V. cholerae O139 sinh độc tố CT, 11 và 5 mẫu dương tính với V. cholerae O1/O139 không sinh độc tố CT, 5 và 2 mẫu dương tính với V. cholerae non - O1/O139 sinh độc tố CT.
Kết quả phản ứng m-PCR3 cho thấy chỉ 3 trong 6 mẫu phát hiện được gen tcpA đặc trưng cho V. cholerae O1 biotype El Tor.
Một số gốc V. cholerae phân lập được đều nhạy cảm doxycycline và norfloxacin và đề kháng hoàn toàn với colistine, đề kháng cao với oxacillin.
Từ khóa: Vibrio cholerae, Động vật thủy hảI sản, Tỷ lệ nhiễm, Serogroup, Biotype, Kỹ thuật m-PCR