Phát triển một phản ứng PCR phát hiện Aspergillus parasiticus

Tóm tắt

Aspergillus parasiticus là một trong các loại nấm mốc tiết độc tố aflatoxin trong thức ăn. Loại nấm mốc này có thể tiết ra aflatoxin B hay G dẫn tới bệnh nghiêm trọng ở người. Aflatoxin là một loại tác nhân gây ung thư. Người ăn phải thức ăn chứa dù chứa lượng nhỏ aflatoxin trong một khoảng thời gian dài có thể mắc phải ung thư do aflatoxin tích tụ. Do vậy, việc nhận biết aflatoxin và nhân tố tiết aflatoxin trong thực phẩm là cần thiết để tăng chất lượng cuộc sống bằng cách giảm nguy cơ mắc bệnh. Gần đây, phương pháp thông dụng để nhận biết A. parasiticus là phương pháp quan sát hình thái, tuy nhiên phương pháp này vẫn còn nhiều hạn chế. Đề tài này phát triển một phản ứng PCR truyền thống nhằm phát hiện A. parasiticus trong thực phẩm vượt qua những hạn chế của phương pháp hình thái hiện đang sử dụng. Một cặp mồi riêng biệt được thiết kế dựa trên genes norB-cypA đã được tối ưu hoá cho kết quả khuếch đại nhiều nhất ở
62  ^oC. Độ nhạy của phương pháp PCR này được xác định là có thể phát hiện DNA nấm mốc A. paraciticus ở nồng độ 0.005 ng/µL. Quy trình tách DNA cũng được tối ưu hoá để đảm bảo sự thành công cho phản ứng PCR bằng cách sử dụng ly giải SDS, cát và sốc nhiệt. Quy trình từ tách DNA đến PCR được phát triển có thể sẽ được ứng dụng để phát hiện A. parasiticus trong thực phẩm ở các giai đọạn khác nhau, tạo công cụ hữu dụng trong việc phát hiện aflatoxins ở giai đoạn đầu và kiểm soát tốt các giai đoạn sản xuất thực phẩm. Thành công của nghiên cứu này là thiết kế được cặp mồi và phản ứng PCR đặc hiệu có thể phân biệt A. parasiticus trong số các loài Aspergillus khác. Phản ứng PCR này có thể tiếp tục phát triển để có thể ứng dụng trong phát hiện A. parasiticus trong thực phẩm trong tương lai.