Bước đầu nghiên cứu sự hiện diện của Sri Lankan Cassava Mosaic Virus (SLCMV) trên sắn (Manihot esculenta Crantz 1766)
Tóm tắt
Các khảo cứu về Sri Lankan Cassava Mosaic Virus (SLCMV) ở tải lượng virus thấp trên cây sắn (Manihot esculenta Crantz 1766), đặc biệt là giống kháng virus hoặc giống sạch bệnh thường đòi hỏi cao về hiệu suất tách chiết và phát hiện DNA mạch đơn của virus (ssDNA). Trong nghiên cứu, bốn quy trình ly trích DNA tổng số khác nhau được dùng nhằm mục đích tách được hàm lượng ssDNA cao. Đồng thời, sử dụng quy trình Polymerase Chain Reaction (PCR) và Real-time PCR (RT-PCR) để phát hiện sự hiện diện của SLCMV với các cặp mồi nhân bản gen Rep/AC1 của virus và cặp mồi nhân bản gen nội chuẩn Beta-Actin của sắn. Kết quả cho thấy, quy trình ly trích DNA cải tiến từ Mason, Caciagli, Accotto, và Noris (2008) và Osena, Nyaboga, và Amugune (2017), tạm gọi là R-kit, cho hàm lượng ssDNA tương đối cao tại vị trí thùy lá, được đề nghị sử dụng. Quy trình PCR và RT-PCR kiểm tra được sự hiện diện của SLCMV trên vật liệu nhiễm bệnh. Ngoài ra, quy trình RT-PCR với cặp mồi SqPCR1 và probe đặc hiệu cho phép phát hiện tín hiệu SLCMV trong mẫu lá bệnh. Hệ số nhân bản gen của cặp mồi SqPCR1 (1.851X) và Beta-Actin (1.896X) cho phép thực hiện đồng thời và phân tích kết quả cùng nhau. Ngưỡng phát hiện của RT-PCR cũng ở mức pha loãng cao hơn PCR. Đây là cơ sở hỗ trợ các khảo cứu SLCMV ở tải lượng thấp trên cây mô hình và giống kháng.
