Tạo dòng gen mã hóa enzyme AA9 Polysaccharide Monooxygenase AN3860 trên vector pEX2B hướng tới biểu hiện trên Aspergillus oryzae

Tóm tắt

Polysaccharide monooxygenases (PMO) là enzyme xúc tác phản ứng oxi hóa thủy giải các chuỗi carbohydrate có cấu trúc khó phá vỡ như cellulose, tinh bột và chitin. Trong lĩnh vực năng lượng sinh học, sự chuyển đổi nguồn sinh khối lignocellulose dồi dào thành đường đơn cho quá trình lên men bằng enzyme li giải cellulase có thể tăng hiệu suất đáng kể khi bổ sung enzyme nhóm AA9 PMO. Những enzyme này được tìm thấy với một số lượng khá lớn trong các loại nấm sinh trưởng sử dụng nguồn sinh khối làm cơ chất. Aspergillus nidulans thuộc nhóm nấm sợi sở hữu một số gen mã hóa cho PMO, tuy nhiên chỉ có AN3860 được biểu hiện ở mức cao khi nuôi trong môi trường bổ sung sợi rơm lúa mì làm nguồn cacbon duy nhất. Phân tích tin học trình tự gen cho thấy AN3860 thuộc loại 3 AA9 PMO có thể oxi hóa linh động cả hai vị trí C1 và C4 của liên kết glycosidic. Do đó, AN3860 có tiềm năng cải thiện được hoạt tính li giải cellulose nhưng cho đến nay vẫn chưa được mô tả. Trong nghiên cứu này, trình bày cách tiếp cận AN3860 bằng phương pháp tạo dòng biểu hiện tái tổ hợp trong Aspergillus oryzae AUT1-PlD. Để thuận lợi cho quá trình tinh sạch AN3860, đuôi CBM20 được gắn vào đầu C của gen mục tiêu. Quá trình tối ưu biểu hiện và nghiên cứu thử nghiệm hoạt tính sẽ được thực hiện tiếp theo.