Xây dựng qui trình định lượng đồng thời nuciferin, pronuciferin, o-nornuciferin và isoliensinin trong lá sen bằng phương pháp HPLC với đầu dò PDA

Tóm tắt

Lá sen là một vị thuốc quý, được biết đến với tác dụng an thần, chữa sốt, viêm ruột, nôn ra máu, chảy máu cam và các chứng chảy máu khác. Dịch chiết lá sen có hoạt tính dược lý và sinh học in vivo như an thần, chống béo phì, chống oxy hóa, viêm gan, hạ đường huyết, kháng HIV. Các hoạt tính này gần như liên quan đến sự có mặt của một số alkaloid chính có tác dụng sinh học trong lá sen như nuciferin, pronuciferin, nor-nuciferin, isoliensinin. Hầu như chưa có công trình nghiên cứu nào xác định hàm lượng các alkaloid này bằng các phương pháp phân tích hiện đại nhằm đảm bảo tính đặc hiệu, độ nhạy và độ chính xác cao. Vì vậy đề tài này được thực hiện nhằm góp phần xây dựng chỉ tiêu định tính, định lượng alkaloid trong lá sen, giúp kiểm soát chất lượng nguyên liệu và chế phẩm từ nguồn nguyên liệu có giá trị sinh học này.

Phương pháp nghiên cứu

Dựa vào cấu trúc hóa học của isoliensinin là một alkaloid phân cực, pronuciferin phân cực trung bình và nuciferin kém phân cực, với giá trị pKa thay đổi trong khoảng 4-8, nên kỹ thuật sắc ký pha đảo đã được áp dụng với hệ dung môi phân cực bao gồm acetonitril và nước có thêm TEA và acid acetic băng. Trong quá trình thực nghiệm, các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả tách và độ chọn lọc của phương pháp đã được khảo sát như bản chất, tỷ lệ thành phần, pH dung môi pha động, tốc độ dòng và bước sóng phát hiện. Sau khi tìm được điều kiện sắc ký thích hợp, sẽ tiến hành thẩm định phương pháp theo hướng dẫn của ICH bao gồm khảo sát tính phù hợp của hệ thống, tính chọn lọc, khoảng tuyến tính, độ chính xác, độ đúng, giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ). Qui trình sau khi được thẩm định sẽ được ứng dụng để định lượng đồng thời các alkaloid trên trong một số mẫu lá sen.

Kết quả

Sử dụng kỹ thuật HPLC với đầu dò PDA, tác giả đã xây dựng được qui trình định lượng đồng thời nuciferin, o-nornuciferin, pronuciferin, isoliensinin trong lá sen. Phương pháp có tính chọn lọc, độ nhạy cao, cho kết quả đúng và chính xác, có thể được áp dụng để kiểm soát hàm lượng các alkaloid có tác dụng sinh học trên có trong nguồn nguyên liệu có giá trị sinh học này cũng như các chế phẩm bào chế từ lá sen, giúp nâng cao chất lượng thành phẩm.

àm��n �\�(� lượng tế bào và khả năng chế tiết cytokin ở 48 giờ. Đáp ứng với các chất thử của tế bào lympho bị suy giảm miễn dịch mạnh hơn đáp ứng của tế bào lympho người bình thường. IL-2 và TNFα vẫn được chế tiết tốt ở thời điểm nuôi cấy 48 giờ.