Nghiên cứu phân tách, xác định hoạt độ và một số tính chất của ribonuclease trứng ếch (Rana rugulosa Wiegmann)

Tóm tắt

            Trứng của ếch đồng có tên khoa học là (Rana rugulosa Wiegmann) đã được biết là có hoạt tính gây độc tế bào. Trứng ếch có ribonuclease (RNase) đang được nhiều nhà khoa học trên thế giới quan tâm nghiên cứu. Ngoài khả năng diệt tế bào ung thư, RNase còn có những tác dụng sinh học quan trọng khác như kháng khuẩn, kháng virus,... Ở Việt Nam, nguồn dư phẩm trứng trong chế biến ếch làm thực phẩm rất phong phú, có thể là nguyên liệu dồi dào cho nghiên cứu chiết tách RNase. Để góp phần khai thác nguồn dư phẩm làm thuốc chữa bệnh, mục tiêu của nghiên cứu là: chiết tách, xác định hoạt độ và một số tính chất của RNase phân lập từ trứng ếch.

Phương pháp nghiên cứu

- Xác định hoạt độ RNase (Hoạt độ RNase, hoạt độ riêng của Rnase, kỹ thuật đục lỗ trên gel agarose 0,8% xác định hoạt độ RNase).

- Chiết tách tinh chế RNase (Nghiền đồng thể và ly tâm tạo dịch chiết trứng ếch (DCTE) 1/5, kết tủa phân đoạn protein enzym, sắc ký cột, sắc ký trao đổi ion tinh chế RNase).

- Xác định một số tính chất của RNase (Thử tính bền nhiệt của RNase, xác định nhiệt độ hoạt động tối ưu và pH hoạt động tối ưu).

- Điện di polyacrylamid không biến tính kết hợp ép gel agarose.

            Kết quả nghiên cứu             Đã lựa chọn được điều kiện thích hợp để chiết tách RNase trứng ếch (môi trường đệm PBS 0,1M pH 7,4, ủ ở 37 ^oC, 30 phút) để chế tạo dịch chiết trứng ếch B (DCTE_B) có hoạt độ riêng RNase A_o là 3,27 ± 0,12 U/μg protein cao hơn có ý nghĩa (p < 0,05) so với môi trường H₂SO₄ trong cùng điều kiện (A_o = 2,72 ± 0,16 U/μg protein).             Từ DCTE_B đã thu được chế phẩm RNase có hoạt độ 40 - 60 U/ml, khối lượng phân tử 12 kDa và đạt độ tinh khiết cao.