Khảo sát tình trạng tổn thương tế bào thận LLC-PK1 khi xử lý với cyclosporin A ở các điều kiện nuôi cấy khác nhau

Tóm tắt

Sau khi ghép tạng, bệnh nhân phải điều trị lâu dài với thuốc ức chế miễn dịch để ngăn tình trạng thải ghép. Cyclosporin A (CsA) là thuốc ức chế miễn dịch được sử dụng rộng rãi để tránh thải ghép trong ghép tạng hoặc trị các bệnh tự miễn. Tuy nhiên, CsA có thể gây một số tác dụng phụ nghiêm trọng, đặc biệt độc tính trên thận do làm tăng biểu hiện Fas/Fas-L, rối loạn chức năng ty thể, stress oxy hóa, tăng sinh gốc oxy tự do, gây hoại tử và apoptosis tế bào thận. Một trong những xu hướng điều trị hiện nay là sử dụng đồng thời CsA với các thuốc có tác dụng bảo vệ thận để hạn chế tổn thương tế bào thận. Tuy nhiên, Việt Nam chưa có nghiên cứu về tình trạng tổn thương tế bào thận in vitro do CsA. Từ tình hình thực tế trên, đề tài này khảo sát tình trạng tổn thương tế bào thận LLC-PK1 khi xử lý với CsA ở các điều kiện nuôi cấy khác nhau.

Đối tượng

Dòng tế bào: LLC-PK1 (ATCC CL101^TM) hoạt hóa.

Hóa chất: Neoral® 25 mg, cyclosporin A, EMEM, huyết thanh bào thai bê, trypsin-EDTA; L-glutamin, penicilin-streptomycin; albumin huyết thanh cừu, PBS, trypan blue, MTT, L-lactic dehydrogenase, silymarin, kit LDH, methanol, diphenylamin, isopropanol.

Phương pháp nghiên cứu

- Xử lý tế bào: Tế bào LLC-PK1 nuôi trong môi trường EMEM.

- Chuẩn bị CsA: CsA nguyên liệu pha trong ethanol tuyệt đối tạo dung dịch mẹ 10 mM, lọc vô trùng 0,22 µm, bảo quản ở -20^oC.

- Đánh giá tỉ lệ tế bào sống bằng test MTT.

- Đánh giá tình trạng hoại tử tế bào.

- Định lượng tình trạng tăng sinh gốc oxy hóa tự do.

- Đánh giá quá trình apoptosis.

- Phân tích kết quả và xử lý thống kê: Sử dụng test Mann-Whitney và Kruskal-Wallis trên phần mềm SPSS 23.0.

Kết luận

Tế bào LLC-PK1 nuôi cấy ở mật độ 3 x 10⁴ tế bào/cm², xử lý với CsA 15 µM trong 48 giờ gây giảm tỷ lệ sống, tăng sinh gốc oxy tự do, gây hoại tử và hoạt hóa apoptosis. Tình trạng tổn thương giảm khi phối hợp với CsA với silymarin.