Xây dựng phương pháp định lượng silybin và isosilybin trong huyết tương thỏ ứng dụng để đánh giá sinh khả dụng chế phẩm chứa silymarin

Tóm tắt

Silymarin là một hỗn hợp gồm các flavonoid được phân lập từ cây khế sữa (Silybum marianum, họ Cúc (Asteraceae) gồm các thành phần: silybin (A, B), isosilybin (A, B), silydianin, silychristin; trong đó silybin và isosilybin là thành phần chính có tác dụng sinh học. Silymarin đã được chứng minh lâm sàng trên điều trị viêm gan cấp và mạn tính, suy gan, gan nhiễm mỡ, bảo vệ tế bào gan và phục hồi chức năng gan cho những người uống rượu bia, ngộ độc thực phẩm, hóa chất, phòng và điều trị hỗ trợ xơ gan và ung thư gan.

Do nồng độ các thành phần trong huyết tương thường ở mức rất thấp (khoảng ng.mL^-1), hệ thống sắc kí lỏng khối phổ là một công cụ có độ nhạy cao, phù hợp để phân tích thành phần trong huyết tương. Hiện nay chưa có nghiên cứu trong nước phát triển định lượng các thành phần silymarin trong huyết tương.Vì vậy, nhóm nghiên cứu thực hiện đề tài này 2 mục tiêu: xây dựng phương pháp định lượng đồng thời silybin và isolysibin trong huyết tươngthỏ và áp dụng trong nghiên cứu sinh khả dụng của một số chế phẩm chứa silymarin.

Nguyên liệu

Các chất chuẩn gồm silybin, isosilybin và quercetin của Hãng Sigma Aldrich (Mỹ). Cao khô silymarin chứa 31,27% silibin và 8,25 % isosilybin (Trung Quốc) được sử dụng làm nguyên liệu để đánh giá sinh khả dụng. Các loại hóa chất thông thường được cung cấp bởi Hãng Merck (Đức).

Phương  pháp nghiên cứu

- Tối ưu hóacác thông số khối phổ.

- Lựa chọn các thông số sắc kí lỏng.

- Xây dựng phương pháp xử lý mẫu huyết tương thỏ chứa silymarin.

- Thẩm định phương pháp phân tích: Theo hướng dẫn của FDA.

- Ứng dụng đánh giá sinh khả dụng đường uống của các dạng bào chế trên mô hình thỏ.

- Xử lý số liệu và tính toán kết quả: Bằng phần mềm MassHunter (Agilent) và Microsoft Excel 2013.

Kết quả

Nghiên cứu đã xây dựng được phương pháp xác định đồng thời silybin và isosilybin trong huyết tương thỏ. Phương pháp xử lý mẫu sử dụng quercetin làm chất nội chuẩn và phương pháp chiết lỏng-lỏng bằng ethyl acetat, sau đó silybin và isosilybin được định lượng bằng sắc kí lỏng - khối phổ. Với ưu điểm rẻ tiền, dễ thực hiện và có độ nhạy cao, phương pháp có thể ứng dụng trong thử nghiệm đánh giá sinh khả dụng trong quá trình nghiên cứu các dạng bào chế chứa silymarin.