THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI CAFFEIN VÀ ACID CHLOROGENIC TRONG HẠT CÀ PHÊ XANH BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO

Tóm tắt

Nghiên cứu được tiến hành nhằm mục đích thẩm định qui trình định lượng đồng thời caffein và acid chlorogenic trong hạt cà phê bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao. Quá trình phân tích được thực hiện trên máy HPLC Waters e2695, cột sắc ký Reliant C18 (5µm; 4,6x250 mm), pha động là acid formic 0,1% trong nước (A) và acetonitril (B). Dung môi pha động được chạy theo gradient nồng độ: Thời điểm ban đầu 5% B, tăng dần tới phút 20 là 10% B rồi giữ cố định cho tới phút 30 phút. Thể tích bơm mẫu là 10 µl. Tốc độ dòng 1 ml/phút. Đo ở 2 bước sóng 270 nm và 330 nm. Quy trình định lượng đã được thẩm định đáp ứng các yêu cầu của ICH (International Conference on Harmonization). Kết quả thu được cho thấy, phương pháp đạt yêu cầu với các chỉ tiêu: độ đặc hiệu, khoảng tuyến tính (R² > 0,99), độ lặp lại cao với RSD < 0,7% đối với diện tích peak và RSD < 0,45 % đối với thời gian lưu, giới hạn phát hiện (≥ 0,06 µg/ml cho CAF và 0,36 µg/ml cho CGA), giới hạn định lượng (≥ 0,19 µg/ml cho CAF và 1,10 µg/ml cho CGA). Độ đúng của phương pháp cũng đạt yêu cầu thông qua chỉ số độ thu hồi nằm trong khoảng 97,31 – 104,26%. Do vậy, phương pháp định lượng phù hợp để xác định đồng thời hàm lượng caffein và acid chlorogenic trong hạt cà phê.