STUDY ON THE LARGE-SCALE FERMENTATION OF THE RECOMBINANT STRAIN ESCHERICHIA COLI BL21 HARBORING GENE ENCODING LIPASE OF BACILLUS SUBTILIS FS2

Abstract

The  lipase  of  Bacillus  subtilis  FS2  is an  extracellular  enzyme   which  consists  of  181  amino acids  and  enable  to  hydrolysis  ester  bonds  of  long-chain  acyl  glyceride  (C  >  10).  The  gene encoding   lipase   was  cloned   and  overexpressed   in  Escherichia    coli   BL21  (DE3)  cells.  The fermentation  processs  of  recombinant  strain  E.  coli  BL21  harboring  gene  lip  was  studied  with different  culturing  media,  it  was  shown  that  the  LB  medium  was  the  best  for  growing  of  E  coli strain  compare  to  the  others.  The  biomass  obtained  from  fermentation  batehs  of the  recombinant strain  E. coli  BL21-Lip  was 21  g/1 in  1 liter  fermenter.  20 g/1 in  10 liter  fermenter and  16 g/1 in 200  liter  fermenter  under  optimal  conditions  at 30°C after  4 hours  with  0.5  mM  Isopropyl  P-D-thiogalactosidase  as  an  inducer.  Maximum  value  of  ODooo for  the  fermentation  process  of the
recombinant  strain  E.  coli  BL21-Lip  on  LB  medium  reached  143  using  the  high  cell  density cuture  method  under  continuously  feeding  glucose.  The  recombinant  lipase  of  24  kDa  was purified  by His-trap  affinity  chromatography  column  at 300 mM  immidazole  concentration  and
purified  protein achieved about 0.4 g lipase per  1 liter growth culture.