Tinh chế biến thể alpha-toxin bất hoạt HlaH35LH48L biểu hiện ở Escherichia coli và tạo kháng huyết thanh trên chuột

Tóm tắt

Alpha-toxin (Hla) là yếu tố độc lực gây ly giải tế bào được tạo ra từ vi khuẩn Staphylococcus aureus, có vai trò quan trọng trong việc phát sinh các bệnh nhiễm trùng khác nhau và được xem là một nhân tố tiềm năng để phát triển vắc-xin. Nghiên cứu nhằm biểu hiện tái tổ hợp Hla_H35LH48L được dung hợp với His-tag ở Escherichia coli BL21(DE3), tinh sạch protein biến thể bất hoạt này và tạo kháng huyết thanh (serum) ở chuột. Kết quả khảo sát cho thấy, điều kiện phù hợp để biểu hiện protein Hla_H35LH48L là ở 30°C, nồng độ IPTG 0,05 mM và thu nhận ở 8 giờ sau cảm ứng. Dựa trên phương pháp sắc ký ái lực giữa đuôi 6xHis và Ni-NTA, protein Hla_H35LH48L thu được với nồng độ 1,17 mg/ml và độ tinh sạch đạt 96%. Kết quả thử nghiệm hoạt tính đối với protein được tinh sạch cho thấy, biến thể Hla_H35LH48L bị mất khả năng gây ly giải tế bào hồng cầu thỏ. Sau bốn lần tiêm chuột với liều 0,05 mg protein Hla_H35LH48L mỗi con, huyết thanh thu nhận có khả năng nhận diện kháng nguyên ở độ pha loãng 1/320.000. Kết quả của nghiên cứu này là tiền đề quan trọng cho các nghiên cứu tiếp theo, nhằm trung hòa Hla in vivo và phát triển vắc-xin phòng S. aureus.