Dòng hóa và biểu hiện protein LTB trong Escherichia coli và Bacillus subtilis

Tóm tắt

Protein LTB là tiểu phần B của độc tố không bền nhiệt (LTs) ở vi khuẩn Escherichia coli ETEC, tiểu phần này không gây độc nhưng lại có khả năng gây đáp ứng miễn dịch cao. Vì vậy, LTB được xem là protein kháng nguyên phù hợp để sản xuất vaccine tiểu phần phòng bệnh tiêu chảy do ETEC gây ra. Ngày nay, các protein kháng nguyên được sản xuất chủ yếu bởi công nghệ protein tái tổ hợp với hệ thống biểu hiện thông dụng là E. coli. Tuy nhiên, các protein do chủng chủ E. coli tạo ra thường lẫn nhiều nội độc tố cần phải được loại bỏ trong các sản phẩm dược. Vì vậy, việc biểu hiện và thu nhận protein kháng nguyên từ chủng biểu hiện khác không tạo ra nội độc tố như Bacillus subtilis đang được quan tâm nghiên cứu. pHT là hệ thống vector mới cho phép biểu hiện protein ở cả E. coli lẫn B. subtilis. Sử dụng hệ thống này, protein LTB được dòng hóa và biểu hiện trên cả hai chủng chủ. Kết quả, plasmid pHT326 cho phép biểu hiện protein LTB ở dạng dung hợp với LysSN-6xHis-TEV trên B. subtilis và E. coli đã được tạo dòng và kiểm tra khả năng biểu hiện. Sự bám của protein dung hợp lên cột tinh chế có ái lực với His-tag cũng đã được kiểm tra. Kết quả này phục vụ cho việc tinh chế thu nhận protein LTB có tiềm năng ứng dụng để phát triển vaccine tiểu phần phòng bệnh tiêu chảy cũng như phát triển các bộ kit chẩn đoán vi khuẩn ETEC trong các mẫu thực phẩm, bệnh phẩm hoặc các bộ kit phát hiện kháng thể kháng LTB trong máu động vật.