Chuẩn bị và đánh giá khả năng giải phóng hGM-CSF của hạt nano chitosan

Tóm tắt

hGM-CSF là nhân tố kích thích tạo đại thực bào-bạch cầu hạt ở người, được tiết ra từ nhiều loại tế bào. hGM-CSFcó nhiều ưu điểm phù hợp cho việc làm tá dược vaccine như có khả năng kích thích sự tồn tại, biệt hóa, tăng cường chức năng của tế bào trình diện kháng nguyên; là tác nhân hướng hóa, tập trung bạch cầu đơn nhân và bạch cầu trung tính đến vị trí xâm nhiễm; kích thích biểu hiện một số cytokine như IL-1, IL-6, TNF cần cho sự nhân dòng và biệt hóa tế bào lympho B và T. Tuy nhiên,GM-CSF có một số nhược điểm như dễ dàng bị phân hủy, gây độc ở nồng độ cao, muốn có tác dụng phải duy trì sự có mặt trong cơ thể ở nồng độ thấp. Bên cạnh đó, hệ thống dẫn truyền thuốc sử dụng hạt chitosan cho thấy có nhiều ưu điểm giúp khắc phục những nhược điểm trên của GM-CSF. Trong nghiên cứu này, hạt chitosan được tạo ra và được đánh giá khả năng hấp phụ và giải phóng protein hGM-CSF. Đầu tiên, hoạt tính của protein hGM-CSF được đánh giá bằng thí nghiệm tăng sinh trên dòng tế bào TF-1. Tiếp theo, hạt chitosan được tổng hợp bằng phương pháp gel ion và được đánh giá độc tính. Sau khi cho hấp phụ protein lên hạt, khả năng dung ly và khả năng bảo vệ protein từ hạt chitosan trong điều kiện in vitro cũng được đánh giá. Kết quả cho thấy protein hGM-CSF có hoạt tính với giá trị ED₅₀=106 pg/mL. Hạt chitosan tổng hợp được có dạng hình cầu với kích thước trung bình 24,5 nm và không có độc tính. Kết quả SDS-PAGE và phương pháp đo Bradford, cho thấy đã hấp phụ protein hGM-CSF lên hạt với hiệu suất trên 99 % và hạt chitosan có khả năng giải phóng và bảo vệ protein hGM-CSF khỏi sự phân hủy của trypsin. Như vậy, hạt chitosan tổng hợp được có khả năng gắn và giải phóng protein hGM-CSF có hoạt tính. Kết quả này là cơ sở để phát triển nghiên cứu tiếp theo ở điều kiện in vivo.