Bước đầu chuyển gen HIV-1 p24 vào lục lạp cây thuốc lá giống V2 bằng phương pháp bắn gen

Tóm tắt

Thuốc lá V2 là giống thuốc lá vàng đang được trồng ở nhiều vùng nguyên liệu của Việt Nam cho sản lượng cao. Để có thể sử dụng chuyển gen lục lạp hiệu quả, các khảo sát về khả năng tái sinh của giống thuốc lá V2 đã được thực hiện. Các mảnh lá được nuôi cấy trên môi trường có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng BAP 1mg/l và NAA 0,1 mg/l  cho tần số tái sinh là 100%, với số chồi trung bình cao nhất/ mảnh lá là 11 chồi. Bên cạnh đó, yếu tố quan trọng trong việc xác định được cây chuyển gen là áp lực chọn lọc phù hợp. Kết quả kiểm tra cho thấy, giống thuốc lá V2 khá nhạy cảm với kháng sinh spectinomycin và streptomycin. Ở nồng độ 80 mg/l, spectinomycin ức chế sư tái sinh chồi từ mảnh lá và tạo cây con từ chồi nách, đối với streptomycin, ngưỡng này là 125 mg/l. Chuyển gen HIV-1 p24 và gen aadA đã được thực hiện vào lục lạp giống thuốc lá V2 thông qua bắn gen. Cây chuyển gen giả định thu được có khả năng kháng spectinomycin và streptomycin lên đến nồng độ 500 mg/l. Qua kiểm tra ban đầu bằng PCR, gen HIV-1 p24  sơ bộ được xác định hiện diện trong bộ máy di truyền các cây chuyển gen giả định với kích thước khuếch đại đoạn đặc hiệu 700 bp.