Biểu hiện và thu nhận enzyme T4 DNA ligase tái tổ hợp trong E. coli

Tóm tắt

Trong nghiên cứu này chúng tôi trình bày kết quả cảm ứng biểu hiện và tinh chế thu nhận enzyme T4 DNA ligase tái tổ hợp. Plasmid tái tổ hợp pET16b-T4Dnl mang gen gp30 mã hóa enzyme T4 DNA ligase. Thẻ 10xHis được gắn vào đầu N của protein T4 DNA ligase để hỗ trợ cho việc tinh chế thu nhận. Chúng tôi tiến hành biến nạp plasmid pET16b-T4Dnl vào tế bào E. coli BL21(DE3). Sau đó tiến hành cảm ứng biểu hiện protein 10xHis-T4Dnl bằng IPTG và tinh chế thu nhận bằng phương pháp sắc ký ái lực với cột Ni-NTA. Kết quả biểu hiện và tinh chế được xác nhận bằng SDS-PAGE và lai Western. Protein thu nhận được thử hoạt tính bằng phương pháp nối các đoạn DNA λ/HindIII.