Tinh sạch protein Saccharomyces cerevisiae Crp1 tái tổ hợp

Tóm tắt

   Phức hợp Mus81-Mms4 là một endonuclease cắt các cấu trúc ADN đặc hiệu ở Saccharomyces cerevisiae. Mus81-Mms4 tham gia vào việc xử lí các cấu trúc trung gian tái tổ hợp mà được hình thành trong quá trình sửa chữa chạc sao chép dừng/lỗi và đứt gãy sợi đôi ADN. Mus81-Mms4 hoạt động với nhiều protein liên quan đến sửa chữa ADN, ổn định chạc sao chép, và hình thành/phân giải các phân tử nối trong con đường sửa chữa bằng tái tổ hợp tương đồng. Một nghiên cứu sàng lọc hóa sinh nhằm tìm kiếm protein có khả năng tăng cường hoạt tính endonuclease của Mus81-Mms4 trên cơ chất ưa thích của phức hợp in vitro đã cho kết quả rằng Crp1, protein nhận biết ADN có cấu trúc cruciform mà có khả năng bám một cách đặc hiệu lên các cấu trúc ADN bốn nhánh tương tự như mối nối Holliday, có thể là kích thích tố tiềm năng của hoạt tính endonuclease của Mus81-Mms4. Nhằm chứng minh tương tác chức năng giữa Crp1 và Mus81-Mms4 in vitro, chúng tôi tiến hành tinh sạch protein Crp1 tái tổ hợp sử dụng hệ thống Escherichia coli. Kết quả thu được thể hiện rằng Crp1 tinh sạch có độ đồng thể cao và có hoạt tính bám ADN cấu trúc đặc hiệu, phù hợp với yêu cầu của các thí nghiệm hóa sinh tiếp theo.