Tạo dòng gene Benchwarmer (BNCH) mang đột biến Glutamic acid 164 thành Lysine (E164K) trên vector pcDNA3.1

Tóm tắt

       Gen Benchwarmer (BNCH) mã hóa protein vận chuyển xuyên màng thuộc họ protein Major Facilitator Superfamily. BNCH vận chuyển các ion, axit amin, đường đơn và lysolipid. Mất chức năng protein BNCH gây chết ở một số mô hình động vật do thoái hóa thần kinh và lão hóa sớm. Ở cấp độ tế bào, rối loạn chức năng gene BNCH dẫn đến các kiểu hình bất lợi ở lysosome và vì thế ảnh hưởng đến quá trình tự thực (bao gồm rối loạn cân bằng nội môi, tích tụ carbohydrate và sphingolipid khiến lysosome phình to). Tuy nhiên, chức năng phân tử của protein BNCH vẫn chưa được hiểu rõ. Trong nghiên cứu này, chúng tôi nhân dòng gene BNCH mang đột biến làm mất chức năng protein BNCH, để tạo nguyên liệu sử dụng cho nghiên cứu chức năng của BNCH. Cụ thể, codon 164 mã hóa axit glutamic 164 sẽ được thay thế bằng lysine (K) (E164K). Vị trí E164 trên gene BNCH được bảo tồn ở nhiều loài động vật (bao gồm ruồi, cá ngựa vằn, chuột và người) cho thấy axit amin này cần thiết về mặt chức năng. Gene BNCH mang đột biến E164K (BNCH*) đã được tạo ra thành công bằng phương pháp gây đột biến hướng điểm và được gắn vào vector cDNA 3.1 để biểu hiện ở tế bào động vật. Plasmid pcDNA3.1 mang BNCH* đột biến và BNCH kiểu dại sẽ cung cấp nguyên liệu để tìm kiếm chức năng phân tử của protein BNCH trong tương lai.