Nghiên cứu tạo điện cực Tyrosinase từ Aspergillus oryzae TP01 và ứng dụng
Tóm tắt
Tyrosinase (EC 1.14.18.1) là enzim thuộc nhóm polyphenoloxydase có chứa ion kim loại đồng (Cu2+ ) trong trung tâm hoạt động. Enzim này xúc tác phản ứng hydroxyl hóa các monophenol thành o-diphenol và oxi hóa o-diphenol thành dopaquinone. Bằng phương pháp kết tủa aceton kết hợp sắc kí qua cột trao đổi ion Mono Q HR 5/5 trên hệ thống FPLC thu được tyrosinase có độ tinh sạch gấp 18,96 lần so với dịch thô ban đầu, hoạt độ riêng đạt 204,75 U/mgPr, hiệu suất đạt 31,63%. Xác định được điều kiện thích hợp cố định enzim trên điện cực: lượng tyrosinase 50U, BSA 1,3 mg, đặt trong hơi glutaraldehyt bão hoà 30 phút, khả năng tái sử dụng 12 lần. Điện cực tyrosinase bảo quản trong túi thiếc ở 4oC sau 50 ngày độ nhạy phát hiện còn 79,51%. Điều kiện thích hợp để phân tích nhanh hàm lượng phenol của điện cực tyrosinase: nhiệt độ 30oC, pH 6,5; nồng độ cơ chất 10-7- 4 × 10-4 M (mono phenol: 10-7 M - 3 × 10-4, diphenol: 10-6 M - 4 × 10-4 . Bước đầu ứng dụng điện cực tyrosinase phát hiện nhanh 3 loại thuốc diệt cỏ atrazin, diuron, 2,4 D và các hợp chất phenol trong nước thải các nhà máy xăng dầu, hoá chất, thuốc lá, nhuộm, xà phòng.