Nghiên cứu thiết lập Nested- PCR ứng dụng trong chẩn đoán bệnh tiên mao trùng gây bởi loài Trypanosoma evansi trên ngựa

Tóm tắt

Trypanosoma evansi, loài ký sinh trùng đường máu gây bệnh tiên mao trùng (TMT) cho các loài động vật nhai lại, ngựa và con người tại Việt Nam. Nhiều phương pháp chẩn đoán phát hiện T. evansi như tiêm máu ngựa nhiễm hoặc không nhiễm bệnh này vào chuột nhắt trắng, nhuộm giemsa, ELISA, dot-ELISA, PCR cho đến nay đã được phát triển và sử dụng. Tuy nhiên, do đặc tính luôn biến đổi kháng nguyên bề mặt của các loài TMT nên mỗi phương pháp chẩn đoán đều có những hạn chế nhất định. Nested PCR
(nPCR) có thể khắc phục được nhược điểm của các phương pháp chẩn đoán T. evansi trước đây. Để thiết lập phản ứng nPCR chẩn đoán phát hiện T. evansi, hai cặp mồi đặc hiệu NTE-F1/NTE-R1 và NTE-F2/ NTE-R2 nhân gen VSG của loài T. evansi đã được thiết kế. Hai cặp mồi thiết kế này đã được kiểm tra độ gắn mồi chính xác, xác định nhiệt độ gắn mồi tối ưu (570C ở PCR vòng 1; và 580C ở nested PCR), và xác
định số vòng khuếch đại tối thiểu (Cycle Threshold, Ct = 35 vòng). Phản ứng nPCR đã được thiết lập chu trình nhiệt, xác định độ nhạy (100%) và độ đặc hiệu (100%); và được ứng dụng chẩn đoán phát hiện loài T. evansi thành công cho 100 mẫu máu ngựa. Chỉ số tương đồng của kết quả chẩn đoán giữa phản ứng nPCR thiết lập và phương pháp tiêm chuột nhắt trắng là 98% (Kappa = 0,95; p < 0,0001).