Nghiên cứu định lượng verapamil trong huyết tương chó bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ

Tóm tắt

Nghiên cứu nhằm xây dựng phương pháp định lượng verapamil trong huyết tương chó bằng sắc ký lỏng khối phổ (LCMS/MS), đáp ứng yêu cầu của Cục Quản lý Thực phẩm và Dược phẩm Hoa Kỳ (FDA) và Dược điển Việt Nam, đồng thời ứng dụng để đánh giá sinh khả dụng in vivo của viên nén nổi verapamil giải phóng kéo dài. Mẫu huyết tương được xử lý bằng phương pháp kết tủa protein kết hợp chiết pha rắn với acetonitril, magnesi sulfat và natri clorid. Verapamil và chuẩn
nội diltiazem được phân tích bằng LC-MS/MS với ion hóa bằng phun điện tử ở chế độ dương (ESI(+)) và ghi phổ phản ứng đa ion đặc trưng (MRM). Phương pháp được thẩm định theo: độ đặc hiệu, tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại, giới hạn định lượng dưới (LLOQ), hiệu suất chiết, độ ổn định và độ nhiễm chéo. Kết quả cho thấy, LLOQ là 5,0 ng/ml, khoảng tuyến tính 5,0-495,0 ng/ml; bình phương hệ số tương quan R²=0,9999, độ đúng 87,1-106,6%, hiệu suất chiết 70,5-79,7%. Mẫu ổn định qua 3 chu kỳ đông - rã, trong quá trình xử lý và bảo quản dài hạn ở -40°C; độ nhiễm chéo trong giới hạn cho phép. Phương pháp được áp dụng định lượng verapamil trong huyết tương chó (n=6) sau uống viên nổi 120 mg; C_max=232,9±18,1 ng/ml; T_max=5,3±1,2 giờ; AUC_0-24=2907,5±290,3 giờ.ng/ml; AUC_0-∞=3310,6±365,0 giờ.ng/ml. Phương pháp đạt độ nhạy, chính xác và độ tin cậy cao, phù hợp nghiên cứu sinh khả dụng các dạng bào chế verapamil.