Định lượng venlafaxin trong huyết tương người bằng phương pháp UPLC-MS/MS

Tóm tắt

Venlafaxin (C₁₇H₂₇NO₄; M = 277,40 g/mol) là một thuốc chống trầm cảm dẫn xuất từ phenylethylamin, ức chế tái hấp thu serotonin và noradrenalin. Ở mức liều điều trị được khuyến nghị sử dụng (75 - 150 mg/ngày), nồng độ venlafaxin tối đa (C_max) trong huyết tương người thấp, khoảng từ 70 - 140 ng/ml. Do vậy việc xác định nồng độ thuốc trong các mẫu huyết tương người bằng các phương pháp HPLC với các detector thông thường như UV-VIS, PDA hoặc huỳnh quang gần như không thể tiến hành được. Dựa trên nguyên lý hoạt động của phương pháp sắc ký lỏng - khối phổ (LC-MS) và tham khảo tài liệu chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu xây dựng phương pháp UPLC-MS/MS có đủ độ nhạy, đặc hiệu, chính xác, định lượng được nồng độ venlafaxin trong các mẫu huyết tương người. Phương pháp phân tích sẽ được áp dụng trong các nghiên cứu tương đương sinh học chế phẩm chứa venlafaxin.

Nguyên liệu

+ Venlafaxin HCl (VENLA) và Chlorpromazin HCl (CLZ) do Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương cung cấp. Chlorpromazin được sử dụng làm chất nội chuẩn (IS) trong phương pháp phân tích. Dung môi, hóa chất đạt tiêu chuẩn tinh khiết dùng cho HPLC và LC/MS. Huyết tương trắng do Viện Huyết học và truyền máu trung ương cung cấp.

Phương pháp nghiên cứu

Tiến hành phân tích trên máy sắc ký lỏng khối phổ siêu hiệu năng Xevo-TQD (Waters) đã được hiệu chuẩn theo qui định của ISO/IEC và GLP với các điều kiện sắc ký và khối phổ.

Chuẩn bị và xử lý các mẫu huyết tương chứa venlafaxin. Tiến hành thẩm định độ đặc hiệu - chọn lọc, giới hạn định lượng dưới, độ đúng, độ chính xác, tỷ lệ thu hồi hoạt chất, độ ổn định ... của phương pháp theo các hướng dẫn thẩm định phương pháp định lượng thuốc trong dịch sinh học của US-FDA và EMEA. 

Kết quả

            Nghiên cứu đã xây dựng được phương pháp định lượng venlafaxin trong huyết tương người bằng UPLC/MS-MS. Với giá trị giới hạn định lượng dưới nhỏ (4 ng/ml) xấp xỉ bằng 1/20 giá trị C_max, khoảng tuyến tính rộng từ 4 đến 200 ng/ml, độ đúng cao (91,2% - 99,5%); độ lặp lại với giá trị CV% nhỏ (2,0% - 10,5%) và thời gian phân tích ngắn (2,5 phút cho mỗi mẫu); phương pháp phân tích có thể ứng dụng trong các nghiên cứu tương đương sinh học thuốc venlafaxin.